Production d’anticorps contre les antigènes érythrocytaires félins non-AB (FEA) : documenter leur immunogénicité et assurer la pérennité du typage sanguin

Abstract

L'identification des antigènes érythrocytaires félins (Feline Erythrocyte Antigen; FEA) 1-5, au-delà du système de groupe sanguin AB, par le biais d'alloanticorps naturels (AcN), et la découverte ultérieure du FEA 6 par la production d'anticorps post-sensibilisation, ont fait progresser de manière significative la médecine transfusionnelle féline. Ces découvertes ont motivé des recherches sur l'immunogénicité de ces antigènes et des efforts pour préserver les capacités de typage des FEA par la mise en banque d'anticorps. Notre travail s'est concentré sur l'étude de l'immunogénicité des antigènes félins et sur la production d'anticorps pour permettre un typage précis. Dans un premier temps, nous avons évalué l'immunogénicité du FEA 6 et produit des anticorps polyclonaux anti-FEA 6. Deux chats de type A négatifs pour FEA 6 et n'ayant jamais reçu de transfusion ont reçu du sang positif pour FEA 6, apparié pour d'autres FEA, ce qui a entraîné la production d'anticorps anti-FEA 6. Ces anticorps ont montré une concordance presque parfaite (kappa = 0,87) avec les anticorps anti-FEA 6 de référence, et une banque de sérum a été créée pour la recherche et l'utilisation clinique. Dans un effort séparé, nous avons cherché à produire des anticorps monoclonaux murins contre les FEAs, en se concentrant sur FEA 1, reconnaissant leur potentiel pour une plus grande stabilité et durabilité. En utilisant une technique conventionnelle d'hybridomes, cinq souris (3 A/J et 2 SLJ) ont été immunisées avec des globules rouges (GR) félins de type A FEA 1-positifs. Parmi les 2 297 hybridomes sélectionnés, 60 clones ont agglutiné les globules rouges félins, mais aucun n'était spécifique à FEA 1. Tous les clones réactifs ont agglutiné différents types de globules rouges félins, y compris des globules rouges FEA 1 positifs, FEA 1 négatifs et des globules rouges de type B. Cet effort n'a pas permis de produire des anticorps anti-FEA 1 ou tout autre anticorps ayant une pertinence potentielle en médecine transfusionnelle féline. Notre étude met en évidence les difficultés liées à la production d'anticorps spécifiques contre les FEA. Bien que nous ayons validé avec succès l'immunogénicité de FEA 6 et établi une banque d'anticorps polyclonaux anti-FEA 6, des obstacles importants subsistent dans le développement d'anticorps monoclonaux stables et spécifiques. Les recherches futures pourraient se concentrer sur l'identification des caractéristiques moléculaires et de la base génétique des FEA, car ces connaissances fondamentales pourraient guider les efforts visant à affiner les protocoles d'immunisation et à explorer d'autres techniques de préparation d'antigènes, facilitant finalement la production d'anticorps monoclonaux. The identification of Feline Erythrocyte Antigens (FEA) 1–5, beyond the AB blood group system, through naturally occurring alloantibodies (NOAb), and the subsequent discovery of FEA 6 via post-sensitization antibody production, has significantly advanced feline transfusion medicine. These findings have driven research into the immunogenicity of these antigens and efforts to preserve FEA typing capabilities by banking antibodies. Our work focused on studying the immunogenicity of FEAs and producing antibodies to support accurate typing. In one investigation, we evaluated the immunogenicity of FEA 6 and produced polyclonal anti-FEA 6 antibodies. Two transfusion-naive FEA 6-negative Type A cats received FEA 6-positive blood matched for other FEAs, resulting in anti-FEA 6 antibody production. These antibodies showed almost perfect agreement (kappa = 0.87) with reference anti-FEA 6 antibodies, and a serum bank was established for research and clinical use. In a separate effort, we aimed to produce murine monoclonal antibodies against FEA (focusing on FEA 1), recognizing their potential for greater stability and sustainability. Using a conventional hybridoma technique, five mice (3 A/J and 2 SLJ) were immunized with Type A FEA 1-positive feline red blood cells (RBC). Among 2,297 hybridomas screened, 60 clones agglutinated feline RBCs, but none were specific to FEA 1. All reactive clones agglutinated various feline RBC types, including FEA 1-positive, FEA 1-negative, and type B RBCs. This effort failed to produce anti-FEA 1 or any antibody with potential relevance in feline transfusion medicine. Our study highlights the challenges of producing specific antibodies against FEAs. While we successfully validated the immunogenicity of FEA 6 and established a bank of polyclonal anti-FEA 6 antibodies, significant obstacles remain in developing stable and specific monoclonal antibodies. Future research can focus on identifying the molecular characteristics and genetic basis of FEAs, as this foundational knowledge can guide efforts to refine immunization protocols and explore alternative antigen preparation techniques, ultimately facilitating the production of monoclonal antibodies.