Le Clone 8, un anticorps monoclonal dirigé contre le CD154 humain, reconnait et inhibe le clivage du CD154 murin
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Maîtrise / Master's
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Mots-clés
- CD154
- CD154 soluble
- Cytométrie en flux
- prolifération
- Cleavage
- OT-II mice
- Ovalbumin
- CD4+ T cells
- Flow cytometry
- Proliferation
- CD40
- Clone 8
- Clivage
- in vitro
- souris OT-II
- Ovalbumine
- T CD4+
- ELISA
Organisme subventionnaire
Résumé
Résumé
Le CD154 est une glycoprotéine transmembranaire de type 2, impliquée dans plusieurs maladies auto-immunes, telles que le lupus érythémateux systémique, la polyarthrite rhumatoïde, la sclérose en plaques. Il joue également un rôle central dans l’activation des cellules immunitaires, notamment dans le cancer. L’interaction du CD154 avec son récepteur principal le CD40, joue un rôle important dans plusieurs processus cellulaires, tels que la prolifération, la différenciation des cellules et le changement de classes d’immunoglobulines. Une altération de cette interaction peut entraîner un dysfonctionnement aboutissant à différentes maladies, tel que le syndrome d'hyper-IgM lié au chromosome X. Cette maladie représente des taux élevés des IgM contre des taux plus faibles d'IgA, d'IgE et d'IgG. Des études antérieures ont démontré qu’un CD154 membranaire, muté à son site de clivage et rendu non-clivable, induit une activation immunitaire accrue et une cytotoxicité élevée contre les cellules tumorales exprimant son récepteur, le CD40. Dans cette optique, notre laboratoire a développé un anticorps monoclonal, Clone 8, capable de reconnaître le CD154 humain et d’inhiber son clivage spontané et induit par le CD40. Dans le travail illustré ici, nous avons prouvé que le Clone 8 reconnaît et lie efficacement le CD154 murin, compte tenu que le site de clivage du CD154 humain et du CD154 murin sont 100% homologues. De même, nous avons montré la capacité du Clone 8 à bloquer le clivage spontané et induit du CD154 aussi bien dans un modèle in-vitro où la concentration du CD154 soluble a été dosée en présence et en absence du Clone 8, qu’ex-vivo en utilisant les cellules T provenant des souris transgéniques OT-II et qui comprennent majoritairement des cellules T CD4+. De plus, nos résultats, ont révélé les cellules spléniques OT-II comme un bon modèle ex-vivo pour l’évaluation ultérieure de l’effet biologique du Clone 8 sur la prolifération cellulaire. L’ensemble de ces résultats ouvrent la voie à de nouvelles stratégies thérapeutiques visant à exploiter un CD154 stabilisé à la membrane pour optimiser l’activation immunitaire, notamment en immunothérapie du cancer.
CD154 is a type II transmembrane glycoprotein involved in several autoimmune diseases, such as systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, and multiple sclerosis. It also plays a central role in immune cell activation, particularly in cancer. The interaction between CD154 and its main receptor, CD40, is crucial for various cellular processes, including cell proliferation, cell differenciation and immunoglobulin class switching. Disruptions in this interaction can lead to dysfunctions associated with different diseases, such as X-linked hyper-IgM syndrome, which is characterized by elevated IgM levels and lower levels of IgA, IgE, and IgG. Previous studies have demonstrated that a membrane-bound CD154, mutated at its cleavage site to prevent its cleavage, enhances immune activation and increases cytotoxicity against tumor cells expressing CD40. In this context, our laboratory has developed a monoclonal antibody, Clone 8, which specifically recognizes human CD154 and inhibits both spontaneous and CD40-induced cleavage. In the work illustrated here, we demonstrated that Clone 8 effectively recognizes and binds murine CD154, given that the cleavage site of human and murine CD154 represents 100% homology between both species. In addition, our data showed that Clone 8 is capable of blocking spontaneous and CD40-induced cleavage of CD154 both in an in-vitro model, where the concentration of soluble CD154 was assayed in the presence and absence of Clone 8, and in ex-vivo using T cells from transgenic mice, OT-II, which include predominantly CD4+ T cells. In addition, we have revealed splenocytes from OT-II mice as an efficient ex-vivo model for the ultimate evaluation of the effect of Clone 8 on specific biological responses such as cell proliferation. Taken together, these results pave the way for new therapeutic strategies aiming at exploiting a CD154 resistant to cleavage and maintained on cell surface for an optimal immune activation, notably in cancer immunotherapy.
CD154 is a type II transmembrane glycoprotein involved in several autoimmune diseases, such as systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, and multiple sclerosis. It also plays a central role in immune cell activation, particularly in cancer. The interaction between CD154 and its main receptor, CD40, is crucial for various cellular processes, including cell proliferation, cell differenciation and immunoglobulin class switching. Disruptions in this interaction can lead to dysfunctions associated with different diseases, such as X-linked hyper-IgM syndrome, which is characterized by elevated IgM levels and lower levels of IgA, IgE, and IgG. Previous studies have demonstrated that a membrane-bound CD154, mutated at its cleavage site to prevent its cleavage, enhances immune activation and increases cytotoxicity against tumor cells expressing CD40. In this context, our laboratory has developed a monoclonal antibody, Clone 8, which specifically recognizes human CD154 and inhibits both spontaneous and CD40-induced cleavage. In the work illustrated here, we demonstrated that Clone 8 effectively recognizes and binds murine CD154, given that the cleavage site of human and murine CD154 represents 100% homology between both species. In addition, our data showed that Clone 8 is capable of blocking spontaneous and CD40-induced cleavage of CD154 both in an in-vitro model, where the concentration of soluble CD154 was assayed in the presence and absence of Clone 8, and in ex-vivo using T cells from transgenic mice, OT-II, which include predominantly CD4+ T cells. In addition, we have revealed splenocytes from OT-II mice as an efficient ex-vivo model for the ultimate evaluation of the effect of Clone 8 on specific biological responses such as cell proliferation. Taken together, these results pave the way for new therapeutic strategies aiming at exploiting a CD154 resistant to cleavage and maintained on cell surface for an optimal immune activation, notably in cancer immunotherapy.
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